一,、賽項名稱
賽項名稱：雞新城疫HI抗體水平測定
賽項類別：常規(guī)賽項þ行業(yè)特色賽項□
賽項組別：中職組□高職組þ
賽項歸屬專業(yè)大類：農(nóng)林牧漁大類
二、賽項目的
本賽項考核的核心技能是雞的采血方法、1%雞紅細胞懸液配制,、紅血球凝集（HA）試驗操作與結(jié)果判定,、四個血凝單位（HAU）病毒溶液配制,、紅血球凝集抑制（HI）試驗操作與結(jié)果判定,、HI抗體滴度報告撰寫等技能,。本賽項考核的核心知識是《動物微生物學(xué)》,、《獸醫(yī)免疫學(xué)》,、《獸醫(yī)臨床診療技術(shù)》、《動物傳染病學(xué)》等專業(yè)課程理論知識,。
本賽項由學(xué)校,、行業(yè)、企業(yè)共設(shè),，是高職畜牧獸醫(yī)專業(yè)的核心技能,，通過技能競賽有效促進學(xué)校建設(shè)并完善實驗、實訓(xùn)平臺,，加強核心技能的訓(xùn)練,，提升高職畜牧獸醫(yī)專業(yè)的人才培養(yǎng)質(zhì)量。同時,，通過競賽方式也有效促進學(xué)校與企業(yè)之間的合作交流,，推動高職畜牧獸醫(yī)等專業(yè)教學(xué)改革和校企合作，共同培養(yǎng)畜牧獸醫(yī)行業(yè)一線技能型人才,。
三,、競賽內(nèi)容
該項目由兩人配合完成，按照操作規(guī)程進行試驗器材的準備,，并進行標識,，合理擺放；之后進行采血,、離心,、洗滌,，配制1%雞紅細胞懸液；用微量移液器在96孔V形微量反應(yīng)板上進行紅血球凝集試驗,，測定新城疫標準抗原的血凝價,；根據(jù)血凝試驗測定的新城疫標準抗原的血凝效價，配制4個血凝單位病毒溶液,；進行被檢血清的血凝抑制試驗操作,，并設(shè)新城疫標準陽性血清對照、陰性血清對照,；正確讀取HI抗體滴度結(jié)果,，并完成試驗相關(guān)記錄和測定結(jié)果報告。
四,、競賽方式
本賽項為團體賽,。每組參賽學(xué)生2名，比賽由2名學(xué)生配合完成,，參賽選手均為高職院校在籍學(xué)生,。每組選手限2名指導(dǎo)教師，指導(dǎo)教師須為本校專兼職教師,。
五,、競賽時間安排與流程
本項目競賽日程與流程安排見表1,。
表1 項目競賽日程安排表
| 時間 |
主要工作 |
|
| 第1天 |
16:00 |
熟悉賽場 |
| 第2天 |
8:00 |
比賽檢錄,，工位抽簽 |
| 8:15 |
選手進入技能比賽場，按工位號就位 |
|
| 8:20 |
技能裁判組成員進入技能比賽場 |
|
| 8:30～11:30 |
選手操作,，裁判評分 |
|
| 11:30～12:00 |
裁判組評分匯總 |
|
| 12:00～12:30 |
成績匯總 |
|
六,、競賽試題
本賽項不設(shè)理論考試，只對技能操作進行綜合考核,，技能競賽題為公開試題,，見本賽項規(guī)程的競賽內(nèi)容。
七,、評分標準制定原則,、評分方法、評分細則
成績評定按照公平,、公正,、客觀的原則進行。項目組設(shè)裁判員5名,，監(jiān)督員5名,，仲裁員3名，由大賽執(zhí)委會聘請相關(guān)專業(yè)職業(yè)技能鑒定高級考評員,、行業(yè)企業(yè)技術(shù)專家,、高等院校及科研院所高級職稱教師或研究員為裁判員,，裁判組根據(jù)賽項特點，采取過程評分的方式評分,，結(jié)果評定采用百分制,。競賽現(xiàn)場每位裁判對每一組選手分別打分，由項目組裁判統(tǒng)一評分,，去掉一個最高分,，去掉一個最低分，其余得分的算術(shù)平均值作為參賽隊伍的最后得分,。項目技能競賽評分標準見表2（全國職業(yè)院校技能大賽官方網(wǎng)站,，http://www.chinaskills-jsw.org/）。
表2 項目技能競賽評分標準
| 序號 |
考核內(nèi)容 |
考核要點 |
分值 |
評分標準 |
| 一 |
試驗器材準備 （8分） |
儀器使用與材料準備 |
2 |
1.儀器正確使用,，1分,； 2.材料準備到位，1分,。 參考評分要點： 未檢查清點儀器材料,，儀器使用不正確，材料準備不到位,，口罩,、乳膠手套穿戴不規(guī)范，酌情扣分,。 |
| 物品標識 |
4 |
3.標識合理,，2分； 4.制作標簽,，標識清晰（注明參賽隊序號,、血凝板編號及日期），2分,。 參考評分要點： (1)使用的燒杯,、離心管（包括管蓋）和血凝反應(yīng)板均要標記，不標識不得分,； (2)標識遺漏或標識不清,，酌情扣分。 |
||
| 實桌面整潔度 |
2 |
5.擺放合理,，2分,； 參考評分要點： 試驗器材無序擺放，不得分,。 |
||
| 二 |
配制1%雞紅細胞懸液 （18分） |
采血方法和采血量 |
6 |
6.抗凝劑適量,，2分； 7.采血方法規(guī)范,、熟練,， 2分,； 8.采血量控制在2-4mL之間，2分,。 參考評分要點： (1)血液與抗凝劑比例4:1,； (2)采血時，雞放置于雞籠上保定采血,； (3)采血局部合理消毒,； (4)采血時一針見血； (5)采血量控制在2-4mL之間 (6)用干棉球按壓止血,； (7)采血后采血局部未見明顯血腫,； (8)采血未成功的，該項不得分,。 * 以上細節(jié)未規(guī)范操作,，酌情扣分，累加6分扣完為止,。 |
| 離心機使用 |
4 |
9.離心機使用規(guī)范,，4分。 參考評分要點： (1)離心前做好平衡,，對稱放入轉(zhuǎn)頭孔內(nèi),； (2)規(guī)范使用天平， (3)離心機自動停止,，機門打開,； * 以上細節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分,，累加扣完4分為止,。 |
||
| 紅細胞懸液配制方法 |
8 |
10.稀釋液倍數(shù)正確,，2分,； 11.離心機轉(zhuǎn)數(shù)、離心時間正確,，2分,； 12.血球洗滌次數(shù)適宜，2分,； 13.壓積紅細胞吸取正確,，2分。 參考評分要點： (1)紅細胞洗滌時,，滅菌生理鹽水為抗凝血的2-3倍稀釋,，稀釋后每離心管最液體體積大不可超過12mL； (2)紅細胞洗滌時滅菌生理鹽水與紅細胞用大量程移液器充分混勻,； (3)離心參數(shù)設(shè)定：2000 r/m,，5-10 min,； (4)紅細胞洗滌時吸除白細胞及血小板等雜質(zhì)； (5)紅細胞洗滌3~5次,； (6)最后配置1%紅細胞為10-20 mL,； * 以上細節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分,，累加扣完8分為止,。 |
||
| 三 |
血凝試驗 （20分） |
器材使用 |
4 |
14.微量移液器使用規(guī)范，2分,； 15.吸頭更換操作符合規(guī)范,，2分。 參考評分要點： (1)加吸頭時操作規(guī)范,，不可用力撞擊槍盒,； (2)微量移液器設(shè)置準確； (3)微量移液器吸取和打出液體操作規(guī)范,，移液器垂直加樣為規(guī)范,，傾斜角度不要過大； * 以上細節(jié)未規(guī)范操作,，酌情扣分,，累加扣完4分為止。 |
| 操作程序 |
6 |
16.吸取試劑更換吸頭,，2分,； 17.加樣順序正確，1分,； 18.倍比稀釋操作規(guī)范,，2分； 19.震蕩及感作時間得當(dāng),，1分,。 參考評分要點： (1)稀釋液加樣完成后，在吸取待檢品前需更換吸頭,； (2)加1%紅細胞時,，按由病毒低濃度往高濃度的方向加樣； (3)倍比稀釋時不產(chǎn)生大量氣泡,； (4)倍比稀釋時混勻充分,，移液正確； (5)加樣時,，吸頭與液面不接觸,； (6)試劑滴加孔內(nèi)； (7)可以使用振蕩器,，以液體不震出來為準,； (8)固液廢棄物分,。 * 以上細節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分,，累加扣完6分為止,。 |
||
| 結(jié)果判定準確 |
10 |
20.能依據(jù)生理鹽水對照孔的RBC呈明顯鈕扣狀沉到孔底時判定結(jié)果，4分,； 21.對照孔結(jié)果正確時,，能確定完全凝集的新城疫標準抗原最高稀釋倍數(shù)為病毒的血凝價，4分,； 22.能把完全凝集的病毒的最高稀釋倍數(shù)作為1個血凝單位,，2分。 參考評分要點： (1)判斷血凝價,，做好記錄,；未做記錄扣分2分； (2)讀數(shù)時,，結(jié)果有跳孔現(xiàn)象的,，每跳1孔扣2分。 |
||
| 四 |
配制4個血凝單位 病毒溶液 （10分） |
器材選擇 |
4 |
23.器材選擇合理,，2分,； 24.使用規(guī)范、熟練,，2分,。 參考評分要點： (1)加吸頭時操作規(guī)范，不可用力撞擊槍盒,； (2)選擇合適量程微量移液器移取樣品,； (3)微量移液器吸取和打出液體操作規(guī)范； * 以上細節(jié)未規(guī)范操作,，酌情扣分,，累加扣完4分為止。 |
| 配制方法 |
4 |
25.稀釋倍數(shù)計算正確,，2分,； 26.稀釋液加入得當(dāng),、操作規(guī)范,，2分。 參考評分要點： (1)根據(jù)血凝價,，正確計算稀釋倍數(shù),；計算錯誤扣2分 (2)微量移液器設(shè)置準確；未規(guī)范操作酌情扣分,。 |
||
| 配制量適宜 |
2 |
27.配制量適宜,，2分,； 注評分要點： 配置量10-20 mL為適量，每超過10 mL扣1分,，最多扣2分,。 |
||
| 五 |
血凝抑制試驗 （20分） |
器材使用 |
4 |
28.器材使用規(guī)范、熟練,，4分,； 參考評分要點： (1)加吸頭時操作規(guī)范，不可用力撞擊槍盒,； (2)微量移液器設(shè)置準確,； (3)微量移液器吸取和打出液體操作規(guī)范，移液器垂直加樣為規(guī)范,，傾斜角度不要過大,； * 以上細節(jié)未規(guī)范操，作酌情扣分,，累加扣完4分為止,。 |
| 操作程序 |
6 |
29.96孔V型微量反應(yīng)板各孔加入的稀釋劑正確，1分,； 30.被檢血清,、新城疫標準陰性血清對照、標準陽性血清對照加入正確,，2分,； 31.感作時間適宜，2分,； 32.吸頭更換正確,，1分。 參考評分要點： (1)參照國標,，對照設(shè)立完整,，每缺一個對照扣1分； (2)稀釋液加樣完成后,，在吸取待檢品前需更換吸頭,； (3)倍比稀釋時不產(chǎn)生大量氣泡； (4)加樣時,，吸頭與液面不接觸,； (5)試劑不滴加到孔外； (6)加1%紅細胞時邊滴加邊震蕩混勻,； (7)感作時間正確,； (8)固液廢棄物分開。 * 以上細節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分,，累加扣完6分為止,。 |
||
| 結(jié)果判定準確 |
10 |
33.能在生理鹽水對照孔紅細胞呈明顯鈕扣狀沉淀到孔底時判定結(jié)果，2分,； 34.在對照孔結(jié)果正確情況下,，能從背側(cè)觀察RBC有無呈淚珠樣流淌，2分,； 35.能把完全不凝集（RBC完全流下）被檢血清的最高稀釋倍數(shù)作為該血清的HI滴度,，3分； 36.陰性血清與標準對照的HI滴度不大于2log2,，陽性血清與標準抗原對照的HI滴度與已知滴度相差1個稀釋度范圍內(nèi),，3分。 參考評分要點： (1)讀數(shù)時,，有跳孔現(xiàn)象的,，每跳1孔扣2分。 (2)判斷血清HI滴度,，做好記錄,；未做記錄扣分2分； |
||
| 六 |
抗體滴度報告 （24分） |
抗體滴度報告 |
2 |
37.抗體滴度報告方式正確,，1分,； 38.試驗記錄清晰，1分 參考評分要點： (1)抗體滴度用以2為底的負對數(shù)（-log2）表示,； (2)試驗記錄和報告書寫整潔,，不亂涂改。 * 以上細節(jié)未規(guī)范書寫,，酌情扣分,，累加扣完2分為止。 |
| 結(jié)果誤差 |
20 |
39.每個樣本1分,，共20個樣本 參考評分要點： (1)結(jié)果誤差±1,，得1分； (2)誤差超過±1,，0分,。 |
||
| 場地整潔度 |
2 |
40.場地整潔，2分 參考評分要點： (1)移液槍調(diào)到最大量程,； (2)其他儀器和器皿未復(fù)位,； (3)注射器未放入廢物缸等，每錯1項扣1分,，扣完為止,。 * 以上細節(jié)未規(guī)范操作,，酌情扣分,，累加扣完2分為止,。 |
||
| 總分 |
100 |
? | ||
八、獎項設(shè)置
本賽項設(shè)一,、二,、三等獎和優(yōu)秀獎，獲獎比例分別為參賽隊數(shù)的10％,、20％,、30%、20%,，末位20%不設(shè)獎,。每位獲獎選手和指導(dǎo)教師均可獲得相應(yīng)證書。
九,、技術(shù)規(guī)范
本賽項以教育部頒布的職業(yè)學(xué)校相關(guān)專業(yè)教學(xué)指導(dǎo)方案和國家職業(yè)標準《動物疫病防治員》（三級）規(guī)定的知識和技能要求為基礎(chǔ),，依據(jù)《新城疫診斷技術(shù)》（GB/T 16550-2008）標準及技能型人才培養(yǎng)要求，確定比賽內(nèi)容及方式,。
十,、競賽規(guī)則
1.參賽選手必須持本人身份證和參賽證競賽。
2.參賽選手提前15分鐘檢錄進入賽場,，按照抽簽座位號參加比賽,，不得擅自變更、調(diào)整,。遲到15分鐘以上者取消參賽資格,；開賽15分鐘后，選手方可離開賽場,。
3.選手進入賽場后須檢查實驗用品是否齊全,，如有疑問向裁判或工作人員詢問。
4.選手在競賽過程中不得擅自離開賽場,，如有特殊情況,，需經(jīng)裁判同意；選手若需休息,、飲水或去洗手間等,，所耗用時間計算在比賽時間內(nèi)。
5.選手實物標簽上不得有任何暗示選手身份的記號或符號,，否則取消競賽成績,。
6.各組參賽選手要做好詳細試驗記錄，判定試驗結(jié)果時要舉手示意裁判,。
7.比賽過程中如果動物出現(xiàn)死亡等意外情況,，舉手示意,，可更換實驗動物,。
8.競賽時間結(jié)束時，選手應(yīng)立即停止操作，不得以任何理由拖延競賽時間,。結(jié)束后舉手示意,，由志愿者記錄結(jié)束時間,，選手簽座位號確認后離開比賽現(xiàn)場,。
十一、賽場環(huán)境
競賽場地為承辦單位獨立的實驗室（東實驗樓一樓獸醫(yī)醫(yī)藥實訓(xùn)室）,，面積約為80m2,，賽場內(nèi)設(shè)有分區(qū)實驗臺，每張實驗臺標有工位號,，每組選手根據(jù)抽簽工位號對應(yīng)實驗臺,。賽場照明、控溫良好,，能提供穩(wěn)定的水,、電，符合競賽標準環(huán)境要求,。
十二,、技術(shù)平臺
本競賽項目需要的儀器設(shè)備符合各高職農(nóng)業(yè)類院校畜牧獸醫(yī)專業(yè)建設(shè)要求。儀器設(shè)備按《新城疫診斷技術(shù)》（GB/T16550-2008）標準要求配制,，且競賽所用儀器,、設(shè)備與材料等均為畜牧獸醫(yī)專業(yè)常用儀器、設(shè)備與材料,。本賽項所用的儀器,、設(shè)備與材料見表3（全國職業(yè)院校技能大賽官方網(wǎng)站，http://www.chinaskills-jsw.org/）,。
表3 項目競賽用儀器,、設(shè)備與材料
| 序號 |
器材或設(shè)備名稱 |
數(shù)量 |
規(guī)格 |
| 1 |
普通托盤天平 |
1臺 |
500g |
| 2 |
普通離心機 |
1臺 |
鹽城凱特TD4 |
| 3 |
微型振蕩器（MH-2） |
1臺 |
? |
| 4 |
DRAGON微量移液器 |
1支 |
0.005～0.05 mL |
| 5 |
DRAGON微量移液器 |
1支 |
0.1～1 mL |
| 6 |
上海佳安/DRAGON微量移液器 |
1支 |
2～10 mL |
| 7 |
微量移液器吸頭 |
150個 |
0.005～0.05 mL |
| 20個 |
0.1～1 mL |
||
| 10個 |
2～10 mL |
||
| 8 |
微量移液器吸頭盒 |
2個 |
0.005～0.05 mL |
| 1個 |
0.1～1 mL |
||
| 9 |
板式微量移液器架 |
1個 |
? |
| 10 |
96孔V型血凝反應(yīng)板 |
5塊 |
? |
| 11 |
燒杯 |
5個 |
50 mL |
| 2個 |
500 mL |
||
| 12 |
禽用采血器 |
2支 |
5 mL |
| 2支 |
10mL |
||
| 13 |
具蓋塑料離心管 |
6支 |
10 mL |
| 14 |
指型離心管 |
6支 |
1.5 mL |
| 15 |
試管架 |
1個 |
? |
| 16 |
指型離心管架 |
1個 |
? |
| 17 |
細記號筆 |
1支 |
? |
| 18 |
實驗白大褂 |
2件 |
? |
| 19 |
生理鹽水 |
500 mL |
? |
| 20 |
檸檬酸鈉溶液 |
20mL |
3.8% |
| 21 |
雞新城疫標準抗原 |
1份 |
? |
| 22 |
被檢血清樣本 |
20個 |
? |
| 23 |
雞新城疫標準陽性血清 |
1份 |
? |
| 24 |
雞新城疫標準陰性血清 |
1份 |
? |
| 25 |
酒精棉球 |
若干 |
75% |
| 26 |
干棉球 |
若干 |
? |
| 27 |
非免疫公雞 |
1只 |
? |
| 28 |
橡膠手套 |
4副 |
? |
| 29 |
醫(yī)用防護口罩 |
2只 |
? |
| 30 |
實驗報告單 |
1張 |
? |
| 31 |
標簽紙 |
若干 |
? |
| 33 |
A4紙 |
2張 |
? |
| 34 |
簽字筆 |
2支 |
? |
十三、安全保障
1.比賽用生物制品均由符合國家標準的企業(yè)生產(chǎn)與提供,，實驗動物（雞）符合生物安全規(guī)范,。
2.賽場的工作人員、裁判員,、參賽選手一律憑大賽執(zhí)委會統(tǒng)一配發(fā)的證件出入,。
3.進入賽場的人員一律不得攜帶包、食品,、飲料,、手機等物品。
4.賽場嚴禁吸煙,。
5.工作人員,、裁判員,、參賽人員等進入賽場后要嚴格閱讀賽場的應(yīng)急安全疏散圖，當(dāng)發(fā)生緊急情況,，聽到疏散指令時,，要迅速按疏散圖撤離賽場。
十四,、申訴與促裁
本賽項在競賽過程中若出現(xiàn)有失公正或有關(guān)人員違規(guī)等現(xiàn)象,，代表領(lǐng)隊可在競賽結(jié)束后2小時之內(nèi)向仲裁組提出申訴,。大賽采取兩級仲裁機制,。賽項設(shè)仲裁工作組，承辦單位設(shè)仲裁委員會,。賽項仲裁工作組在接到申訴后的2小時內(nèi)組織復(fù)議,，并及時反饋復(fù)議結(jié)果。申訴方對復(fù)議結(jié)果仍有異議,，可由領(lǐng)隊向承辦單位仲裁委員會提出申訴,。承辦單位仲裁委員會的仲裁結(jié)果為最終結(jié)果。
十五,、競賽須知
（一）參賽隊須知
1.發(fā)揚良好的道德風(fēng)尚,，聽從指揮，服從裁判,，不弄虛作假,。
2.堅決執(zhí)行競賽的各項規(guī)定，對競賽期間的意見和建議及時向執(zhí)委會提出,。
3.各參賽隊應(yīng)可在競賽開始前一天規(guī)定時間段進入賽場熟悉環(huán)境,。
（二）指導(dǎo)教師須知
1.每組選手限2名指導(dǎo)教師。
2.指導(dǎo)教師經(jīng)報名并通過資格審查后確定,，選手和指導(dǎo)教師的對應(yīng)關(guān)系一經(jīng)確定不得隨意變更,。
3.比賽期間，指導(dǎo)教師不得進入競賽場地內(nèi),，發(fā)現(xiàn)違規(guī)取消該隊參賽資格,。
（三）參賽選手須知
1.參賽選手嚴格遵守賽場規(guī)章、操作規(guī)程,，保證人身及設(shè)備安全,，接受裁判員的監(jiān)督和警示，文明競賽,。
2.選手參賽時不得離開競賽場地,，如有特殊情況，需經(jīng)裁判人員同意后方可離開,，但離開期間的時間一律計算在競賽時間內(nèi),。
3.每批次參賽選手必須在正式競賽前30分鐘到候賽場報到,，報到時應(yīng)持本人身份證或?qū)W生證，并攜帶大賽組委會簽發(fā)的參賽證,。
4.競賽時,，在收到開賽信號前不得啟動操作，只有等競賽正式開始后,，方可進行操作,。各參賽選手需在抽簽確定的座位上完成相應(yīng)競賽項目，嚴禁作弊行為,。
5.比賽期間,，參賽選手必須嚴格遵守賽場紀律，不得在賽場內(nèi)大聲喧嘩,，不得作弊或弄虛作假,；同時，必須嚴格遵守操作規(guī)程,，確保設(shè)備和人身安全,，并接受裁判員的監(jiān)督和警示。若因選手因素造成設(shè)備故障或損壞,，無法進行競賽,，裁判長有權(quán)終止該隊比賽；若因非選手個人因素造成設(shè)備故障的,，由裁判長視具體情況做出裁決,。
6.在競賽規(guī)定時間結(jié)束時各參賽隊應(yīng)立即停止操作，不得以任何理由拖延競賽時間,。參賽隊欲提前結(jié)束競賽,，應(yīng)向現(xiàn)場裁判員舉手示意并記錄競賽終止時間。競賽終止后,，不得再進行任何與競賽有關(guān)的操作,。
7.競賽操作結(jié)束時，各參賽隊要按照大賽要求提交競賽材料,，按照現(xiàn)場考試要求的名字進行命名,，如不符合命名規(guī)則，體現(xiàn)單位信息與編號信息的,，取消該隊競賽成績,。